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    Evaluación de una técnica de PCR cuantitativa para el diagnóstico clínico de la histoplasmosis importada

    Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica 2007;25(1): 16-22

    medes_medicina en español

    JOSÉ BUITRAGO M, MONZÓN A, LUIS RODRÍGUEZ-TUDELA J, GÓMEZ-LÓPEZ A, CUENCA-ESTRELLA M

    Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica 2007;25(1): 16-22

    Tipo artículo: Artículo

    Resumen del Autor: <FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>Objetivos. Valoración de la utilidad de una técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) cuantitativa en tiempo real (PCR-TR) para el diagnóstico de histoplasmosis en muestras clínicas. <FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>Métodos. Para el diseño de los iniciadores y de las sondas se analizaron las secuencias de las regiones ITS <FONT FACE="Univers 65 BoldOblique" SIZE=2>(internal transcriber spacers) <FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>del ADN ribosómico de 20 cepas de<FONT FACE="Univers 65 BoldOblique" SIZE=2> Histoplasma capsulatum<FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>. Se empleó la tecnología LightCycler (Roche Applied Science) y la sonda fue diseñada mediante el sistema Fluoresce Resonance Energy Transfer (FRET). Se realizaron estudios de reproducibilidad, sensibilidad y especificidad. Además, se incluyó un sistema de control interno para reconocer falsos negativos por inhibición de la reacción de PCR. Tras ello, se testó la técnica en 22 muestras clínicas procedentes de 14 pacientes diagnosticados de histoplasmosis probada. Además se analizaron 30 muestras de control, procedentes de enfermos con otras micosis, de pacientes con neutropenia febril y de voluntarios sanos. <FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>Resultados. El límite de detección de la técnica fue de 1 fg de ADN fúngico por <FONT FACE="MathematicalPi 4" SIZE=2>m<FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>l de muestra. Así mismo fue reproducible y muy específica. La técnica fue positiva en 11 de los 14 enfermos (78,6%) y en 17 de las 22 muestras analizadas (77,3%). Por muestras, el 100% de las muestras respiratorias y de los aspirados de médula ósea fueron positivos, pero sólo el 70% de los sueros (p < 0,01). La cantidad media de ADN detectado en suero fue de 23,1 fg/<span lang="CA" style="font-size: 12.0pt; font-family: Times New Roman">µ<FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>l, mientras que en muestras respiratorias y aspirados medulares fue de 4,85 x<FONT FACE="MathematicalPi 4" SIZE=2> <FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>10 3 fg/<span lang="CA" style="font-size: 12.0pt; font-family: Times New Roman">µ<FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>l (p < 0,01). La técnica de PCR-TR fue positiva en suero de 3 enfermos por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) positivos, en los que la detección de anticuerpos por inmunodifusión fue negativa. La especificidad fue del 100%, ya que ninguna de las muestras de control dio un resultado positivo. <FONT FACE="Univers 65 Bold" SIZE=2>Conclusión. Esta técnica de PCR-TR es un método sensible y específico para el diagnóstico rápido de histoplasmosis, sobre todo en muestras respiratorias y aspirados de médula ósea. La sensibilidad en suero es inferior, pero puede ser complementaria al cultivo y a la serología en enfermos VIH positivos.

    Notas:

     

    Palabras clave:

    ID MEDES: 25901



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