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    Uso combinado de amplificación aleatoria de polimorfismo del ADN (RAPD) y reacción en cadena de la polimerasa (touchdown PCR) en el estudio epidemiológico de Aspergillus fumigatus

    Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica 2003;21(9): 472-476

    medes_medicina en español

    RODRÍGUEZ-NÓVOA S, GARCÍA-ZABARTE Á, GARCÍA-RIESTRA C, TREVIÑO-CASTELLANO M, LLOVO-TABOADA J, REGUEIRO-GARCÍA BJ

    Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica 2003;21(9): 472-476

    Tipo artículo: Artículo

    Resumen del Autor: Introducción. Aspergillus fumigatus es un hongo filamentoso que se comporta como patógeno oportunista y constituye una de las complicaciones infecciosas más importantes en los pacientes inmunocomprometidos. Los brotes nosocomiales de aspergilosis son cada vez más frecuentes, pero su identificación y caracterización epidemiológica es lenta y laboriosa. Objetivo. Describir un método rápido, sensible y específico para la identificación de A. fumigatus y su caracterización genotípica dentro de las posibilidades diagnósticas habituales en un laboratorio clínico de microbiología. Métodos. Se utilizaron cepas de A. fumigatus procedentes de pacientes con aspergilosis invasivas (n = 4), medio ambiente hospitalario (n = 5) y colecciones de referencia (n = 1), así como otras especies fúngicas filogenéticamente próximas aisladas de pacientes (n = 1), del medio hospitalario (n = 6) o de colecciones de referencia (n = 1). La identificación de A. fumigatus se realizó tanto por métodos fenotípicos clásicos como mediante touchdown PCR (reacción en cadena de la polimerasa). La caracterización genotípica se llevó a cabo por RAPD (polimorfismo derivado de la amplificación aleatoria de ADN), comparando distintos protocolos de amplificación y tipos de primer (OPZ-19 y R-108) en relación con su poder resolutivo y reproducibilidad. Resultados. Los resultados de la identificación fenotípica y molecular coincidieron plenamente. La caracterización molecular por RAPD presentó los mejores resultados, en cuanto a reproducibilidad y resolución se refiere, con el primer R-108 y tiempo prolongado de transición entre hibridación y elongación. Conclusión. El análisis por RAPD es un método seguro y rápido para la caracterización genotípica de A. fumigatus cuyos patrones de bandas son fáciles de interpretar y reproducir cuando se prolonga drásticamente el tiempo de transición entre la hibridación y la extensión. El uso combinado de touchdown PCR y análisis por RAPD constituye un método sensible y exacto para la resolución de brotes nosocomiales por A. fumigatus.

    Notas:

     

    Palabras clave: Aspergillus fumigatus, Brotes de enfermedades, Infección hospitalaria, Reacción en cadena de la polimerasa, Técnicas de tipificación bacteriana

    ID MEDES: 11663



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